有没有遇到过冻细胞挑状态很好的细胞冻存，复苏以后全死翘翘了？哈哈哈。[捂脸R] 有没有可能是冻存细胞的手法或者方法有问题？[吃瓜R] 🎃冻存原则： 慢冻。即让细胞在缓慢降温的条件下逐渐冷冻。如果直接将细胞悬液放在超低温下快速冷冻，细胞会受到冷冻损伤而死亡。 🎃冻存需要材料： DMSO，血清（可有可无，根据实际情况决定是否加血清），培养基，冻存盒，冻存管。 ❗️❗️❗️❗️❗️需注意的是 1.DMSO溶于培养基时，将释放大量热量，所以冻存液需提前配制，不能直接将DMSO加入含有细胞的培养基中，避免烫伤细胞。（是不是有人这么干的？？？） 2.冻存盒完全解冻后再使用！半冻不冻的盒冻存细胞百分之99.99999死翘翘。 🎃冻存液可以自己配，也可以买程序冻存液。成分一般由基础培养基、胎牛血清、DMSO组成。 🎃推荐冻存液配比： 比较好养的细胞：90%基础培养基＋5%DMSO 状态容易不好的细胞：70%基础培养基＋20%胎牛血清+5%DMSO 特别难养的细胞：90%胎牛血清+10%DMSO冻存。 🎃冻存细胞密度： 冻存和复苏过程中，不可避免会损失部分细胞，所以冻存的密度不能太低。提高冻存密度有助于提升复苏存活率，我一般10cm的量的细胞冻2支细胞。 🎃细胞冻存操作步骤 1：配制程序冻存液，放在室温备用或放在4℃预冷。 2：离心收集对数生长期的细胞（贴壁细胞消化下来离心，悬浮细胞直接离心。 3：用配制好的冻存液重悬细胞，按照1~1.5mL/管分装到冻存管中，拧紧管盖，做好标记 4：冻存管放入冻存盒，冻存盒放入-80℃冰箱过夜（24h） 5：冻存管从冻存盒取出，转移至液氮长期保存