今天给大家分享一篇关于WB 的文献综述，这篇文章主要讨论了WB综合优化方法，作者针对WB在时间消耗、步骤繁多和方法结果不理想等方面存在的问题进行了改进，挺有参考意义的。 🍑电泳： 1、首先是配胶，作者缩短了时间（图2） 他们简化了胶的配制方案。因为TEMED催化AP产生自由基，最后形成三维网络，也就是说，不加AP的部分可长期呈液态。他们的实验结果表明，不加AP的其他试剂可以提前配成一个混合母液备用，在4度可以避光保存一个月或更长时间。这样配胶就大大节省了时间，不用一个一个成分加。 2、电泳缓冲液配方的改进（图3） 作者首先是测了一下电泳高电压的影响（200v），发现电压升高时会失去部分蛋白质信号（尤其是小蛋白），为了加速电泳，他们修改了电泳缓冲液的配方（配方见图3），改良的电泳缓冲液可以在室温200 V下35分钟内完成电泳，并且不会丢失蛋白（这个大家可以试试）。 🍑转膜： 3、转膜缓冲液作者用乙醇代替甲醇以降低毒性，发现转膜效果并没有变差。 4、不同分子量的蛋白质最适宜转膜时间不同 这点之前本人也提到过，丰度高的蛋白适当延长转膜时间不会有什么影响，而低丰度的蛋白质需要相对合适的转膜时间。（具体可看文献） 5、对PVDF膜和NC膜进行了比较 结果是：0.22μm PVDF膜转小蛋白的效果明显强于0.45μm PVDF膜和0.45μm NC膜， 而0.45μm NC膜比0.45μm PVDF好用。 6、裁膜也能避免条带造假 这点本人之前也提到过嘿嘿，作者在转膜后用笔在膜上标记（这里推荐使用用圆珠笔）；裁膜后将这些条带再拼接成一个完整的膜，然后保留了拼接后的图像，照片加个人笔迹证实了膜的一致性。（有些参考意义） 🍑封闭 7、快封优于脱脂牛奶 作者比较了聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）与5%脱脂乳的封闭效率。 PVP-40封闭10分钟的蛋白信号强度显著高于脱脂牛奶封闭1小时，但是PVP-40在室温下只能储存一周，而添加0.05–1%无毒的ProClin可以大大延长保质期。