免疫共沉淀这种实验看似简单，其实做好是不太容易的，实验过程中该踩的坑可能都踩过，慢慢也有一些自己的想法，到后来基本每次做都可以做出数据，这篇笔记包括免疫共沉淀（co-ip）详细到每一步的注意要点和小技巧，分享给大家，码住吧～注意一下肯定是可以改善条带状况的。 IP buffer是自配的，配方已列出，自取。 🍀PS：关于一抗和beads。 1.做纯内源co-ip时（也就是检测细胞自身内源蛋白的结合），拉目的蛋白使用一抗和beads，选择可以做ip的一抗（一定要好用的抗体），一般比较好用的抗体2ul即可拉下来，一抗过夜起码结合12h后在加beads。 🎃beads用的protein A+G，碧云天的（还可以，挺好用，加30ul） 🍀2.做外源co-ip时（也就是转染目的基因到细胞里），然后检测外源蛋白的结合，拉目的蛋白使用标签蛋白比较好拉！！！ （ps: 转染带目的基因的载体会在构建质粒的时候带上融合标签，例如：Flag,Myc,HA等，方便后续检测，因为标签蛋白便宜大碗） 🎃beads用的自带一抗的珠子，康体生命家的。他家可以领试用装哦！有需要的宝子可以试试[自拍R][自拍R] （不需要一抗和beads分开孵育，直接孵育beads即可，并且是去除igG的，如果目的蛋白在igG附近，可以使用这种beads，或者去除igG的二抗，但是去除igG的二抗个人用过一些牌子的，没有遇到过很好用的，都不能完全去除。） ip buffer配方放评论区啦！ 做co-ip裂解蛋白时，一定要加蛋白酶抑制剂，另外，input个人建议采用ripa等更强的裂解液去裂解，用来ip目的蛋白的再用ip buffer温和裂解～