关于wb的一些问题： 🍀一、内参不是必须要很齐，能说明问题即可，尽可能减少非必要的实验重复，浪费时间浪费精力。（可以看看文章里面的一些条带，其实也并没有多么好看，图2） 🍀二、是否可以裁膜？（图5） 答案是可以。现在有些杂志社都要求wb提供整膜，也就是一个figure的所有条带必须在一张膜上。（🔍之前专门去了解过一些要求整膜的杂志汇总，很多都是水刊，且有一些已被⚠️，据本人了解，nature子刊，还有很多别的好杂志并没有这个必须要整膜的要求。 🔝ps：但是有些情况可以整膜孵育，反而节省时间节省精力。（图6，这部分放评论区阐述） 🍀三、wb条带原始图片要求是什么？（图3） 1、每一张原始图片都要附带marker，且marker清晰。 2、每一张原始图片的marker需2条以上，个人建议3-4条即可。 3、原始图片裁剪要整齐，不要坑坑洼洼。 原始图片需看到膜的边缘，以证明此膜是经过物理裁剪而不是ps，也就是漏出膜的上下左右边缘线。 4、原始图片上可以写字，简要表明此膜孵育的是什么蛋白，原始图片标记不要写到marker上以及条带附近，可写到膜的边缘，并且这点已被某wb综述收录。 🍀四、什么样的条带可以用？（图4） 1、理想条带：条带清晰，趋势显著，背景干净无杂带。 2、条带清晰，但marker也被染色。这是由于一抗非特异性结合了预染蛋白而导致的，这种图也可以用做最终原始数据。（如最左图） 3、目的条带清晰，但是有杂带。（如中图）如若杂带单一，主要是目的蛋白信号强，且杂带比较稳定，每次跑胶都会出现，也可作为最终目的条带，投稿时说明问题即可。 4、条带清晰，背景略黑。只要marker和条带都比较清晰，即可作为最终数据。（如最右图） 5、条带与实际位置不符，但是也没差太多，且每次孵育都在同一位置，也可作为最终数据，投稿时说明即可。 🍀五、关于膜拼接不拼接的问题： 普通wb可拼可不拼，ip条带要拼膜！ 被ip蛋白A和ib的蛋白B单独曝光后再拼一起证明一下，尤其是做泛素化的，ub和ip蛋白要拼接。