老有宝问我贴壁细胞铺不匀是怎么回事，今天给大家分享一下我是如何搞定贴壁细胞，以及悬浮细胞如何处理！（二者培养还是有区别的） ‼️PS: 处理细胞之前：把生物安全柜照紫外30min，拿出所需耗材：培养皿🧫（比克曼的，撸的羊毛），培养基（用的国产gibco），PBS（磷酸缓冲液，如果不洗细胞就不用拿出） 贴壁细胞的处理要点： ✅1.细胞离心之后用培养基重悬（3～5ml左右），吹打10次，把因离心紧挨在一块的细胞都吹开，吹成一粒一粒的，轻柔！ ✅2.细胞重悬液加入培养皿后晃匀，采用8字晃匀法。（图4实况图） ✅3.重点：晃匀之后检查有无气泡🫧，如果有气泡赶紧弄掉，戳破。 （图5展示了有气泡镜下细胞的样子，虽然在培养箱里气泡会自己消失，但是因气泡而不均匀的细胞就会一直那样子，细胞悬液加入培养皿时就尽量不要把气泡打进去。） ✅4.重点：晃匀之后静置2分钟！！！！（图6）静待细胞沉底，细胞沉底之后去显微镜下观察，此时的细胞未贴壁只是沉底，此时的细胞均匀度大概率就是细胞贴壁之后的均匀度。 因此：沉底的细胞看着均匀，就可以放入培养箱，如果不均匀，重新摇晃。 悬浮细胞的处理要点： ✅1. 细胞状态佳的话，传代可直接传代，把一皿的细胞1分为2，然后往2个皿中补新的培养基。 ✅2.细胞长到90%再传代，和贴壁不太一样，贴壁细胞因为是贴壁长，要及时传代，而悬浮细胞是悬浮在培养基中生长，因此不用一直处理或传代太多，细胞密一些反而生长效果好。 🎃分享给大家我日常处理细胞的习惯： 1.往培养皿里加培养基时，培养皿的盖子只打开一个小缝即可，不用全部打开。（图3） 2.开培养皿盖，关培养皿盖的手法，吸培养基，加培养基都适用。（图9实况图）这样可以尽可能保证细胞不污染，培养皿开口不对着人。 PS：推荐一个培养皿🧫，本人最近撸到了比克曼的羊毛哈哈哈🦙，一包10个，感觉质感还不错，适用于贴壁和悬浮细胞的培养，而且包装没有太大，其实挺不喜欢那种一包几十个的…真的很不方便拿。（不说牌子了，总之使用感一般）