慢病毒感染这样做，会效率很高。 🦠1.首先保证你的质粒是好用的，转染效果是没问题的。（瞬时转染贴壁细胞验证一下，不然病毒再好也白搭。）质粒是我自己构建的，很好用[萌萌哒R]，至于咋构建的宝宝们可以去看我之前的贴，有发过详细的protocol。 🦠2.其次是包装病毒体系： 我用的PEI，细胞用的293包装病毒。 plasmid:PS:PM🟰9：6：3ug （一个10cm皿的量） 收48h和96h的病毒液🦠 （最初加12ml培基，会消耗一些所以多加一点，中途适当加液，保证细胞状态，状态好吐的病毒质量才好） 🦠3.然后是病毒处理： 用无菌注射器💉先过滤病毒原液（参考图上），0.22滤头过滤比0.45的更好更干净。 🦠4.紧接着是病毒浓缩： PEG8000➕4M Nacl 浓缩，20ml病毒原液➕5.5ml PEG8000和2ml 4M Nacl。 摇床4度摇12～24h，不要摇太久，病毒会降低活性导致感染效率降低。 摇完之后离心病毒液，4500rpm*30min，病毒沉淀用培养基重悬，负80保存。 （PEG8000配方：44g定容至100ml，dd水💦） 🦠5.感染病毒最重要的原则： 1.尽可能用少的细胞去感染，有的很好养的很皮实的细胞，完全可以降低细胞使用量，这样感染效率会更好一点。 2.个人经验是浓缩过的病毒液比病毒原液感染效果好，原液感染细胞更容易死，更容易污染。 ❗️❗️❗️PS:个人建议包病毒不要扣扣搜搜用6孔板或者5cm去包装，有宝贝问我，一个皿就转3～4ug质粒包病毒，那效率能高吗？感染不进去又浪费板子浪费质粒，除非是穷的不能再穷了，不穷的话起码10cm皿起包，不要做无用功磨洋功，没用，另外，包装病毒质粒体系直接关系到病毒滴度和效率的问题。