想当年我也是一个月都跑不出一个好看的条带，唯有熟尔。[得意R] WB想要跑的好看的小心得： 1：上样量必须少，蛋白浓度不能低！！！上一样质量的蛋白上样量少的条带就是会好看，制作蛋白样品的时候就给它弄浓点。 咋弄浓呢？铺板细胞多一点，然后自己摸索那么多细胞最少➕多少裂解液可以裂解的比较充分，如果这个比较难把握的话，那就做蛋白样品的时候直接加高浓度loading到样品里，少用那些低浓度loading ，算加多少到1*，加进去浓度就刚刚好，不稀也不浓，尽可能保证样品体积小，不要稀释蛋白。 图上我是上的5ul，才5ul也是短短时间就爆出来了，尤其是抗体不难用的情况下，更得降低上样量！信我。定量？（我基本不定量，除非一些特殊的实验，全凭感觉。） 2：每个孔上样量要一致！！！如果因为调内参导致上样量有差别，那就补齐！用loading给上样少的补到一样体积！！ （好多宝宝问怎么补齐，我说一下：跑胶的时候假如说你左边孔上6ul，右边孔上10ul，再➕4ul和样品一样的loading进去左边孔，轻轻的加进去，补齐的loading浓度尽量和蛋白样品的loading浓度一致，1*那补齐的也用1*） 3：不要随便用别人的loading！！或者随手抓一个去补齐或者压边，尤其是正式实验，预实验无所谓，最好用制作你那批蛋白样品的那个loading。 4：NB老师的跑胶大法非常好，先10v跑20min，再开始85v跑上层，130v跑下层。[萌萌哒R] 更详细的WB和ip小经验大家可以看看我以前的贴，都是干货哦。[喝奶茶R]