所有条带均来自本人➕粉丝投稿，🈲盗图。 （都是我研一研二的图哈哈哈，现在已成功战胜西方印记！！😾） 👾图中涉及条带的解决方案如下： ✅2、6、7 均为凝胶配制的问题： 胶最好现配现用；玻璃板和插胶梳使用前务必清洗干净，且风干后再使用；配胶液从冰箱拿出可放置10分钟使其没那么冷的时候再进行配制；配胶液充分混匀后再倒入玻璃板。 ✅1、13 ：用转膜夹夹紧三明治🥪，微紧状态即可；湿转法使用冰水混合物，湿转液提前预冷；转膜用日常使用时电压较稳的电源。 ✅3 ：蛋白浓度尽可能高，以此减少上样量；一抗4负过夜孵育12小时，不太好出的一抗可4度孵育24小时；上样量多时，采用1.5的板或者大孔胶。 ✅4 ：降低上样量；稀释一抗or稀释发光液。 ✅5 ：封闭盒，抗体孵育盒使用前冲洗干净；手套保持干净；尽可能不要碰到膜的正面；膜使用之前充分激活。 ✅8 ：换一抗or换marker，此为预染蛋白和一抗的非特异性结合。 ✅9 ：一些特殊蛋白提取时添加蛋白酶抑制剂；丰度较低的蛋白增加上样质量；转膜注意别插反；使用超敏发光液。 ✅10 ：上样时胶的最左侧和最右侧泳道不要上蛋白样品，可用loading补齐压边。 ✅11 ：转膜时赶走胶和膜之间的气泡；脱脂奶粉封闭可适量提高浓度，例如6～7%；封闭完可用tbst空洗膜10min再敷一抗；选择快封or BSA封闭。 ✅12 ：此为脱脂牛奶封闭常见问题，建议重新配牛奶or溶解牛奶时间延长，以免有颗粒物。 ✅14 ：更换一抗；蛋白样品裂解后离心，转速和时间为：12000rpm*30min。 ✅15 ：发光时条带趋势明显即可，不要过曝，使得条带很粗很黑，在有趋势，条带清晰的基础上，发光时间越短越好。 根据条带的问题调整实验方法，会慢慢改善的哦，希望大家都可以战胜西方印记！！‼️😾 之前本人也分享过一些wb的tips和注意事项，合集【wb蛋白免疫印迹】里面查阅哦～[扯脸H]