如果是买质粒的话，就不需要参考啦。 但蛮多实验室应该都会涉及到自己构建质粒，尤其是研究方向和生物有关的童鞋～ 我对质粒构建方面🈶少许经验，平时Cas9，WT质粒，突变体，截断体都做过，从硕士到现在起码构建过20➕个质粒啦😭 ✅这篇是关于WT野生型质粒如何构建的详细protocol（酶切法，同源重组改天出protocol‼️） 从寻找目的基因序列，到设计引物到最后测序和比对，验证都有详细列出，希望对大家有些许帮助。 📝此笔记主要内容： 1、质粒测序单应该如何填写？（擎科生物测序） 2、如何寻找目的基因序列？（pubmed） 3、如何设计质粒的primer？（双酶切法） 4、后续pcr，产物纯化，酶切，连接，转化的步骤和注意事项。⚠️ 5、质粒测序返回的结果如何比对？ 6、如何验证质粒是否真正表达？ 如果UU们想要详细的屁屁踢，也可以s我哦，无尝分享。👅 ‼️ps： 1、测序时大家可以菌p验证后再送测序。 2、建议测序送菌液or质粒，不要送平板。 3、个人经验之谈：平板长得菌数量不多，成功可能性大；长了很多菌，可能是载体自连了。 ➡️测序建议送靠谱的公司，个人比较推荐【擎科生物】，这家公司我用4年了～ 他们家主打一个测序快速💨，闪电式拿样，闪电式出结果😄，定制化取样时间，可上门或就近取样～取样小哥每次来拿样直接到我们实验室冰箱自己就拿走了哈哈哈哈，很方便，不要自己来回跑。🤪 🌟比如说送质粒的话当天下午6点送样后，第二天7点就会出结果； 🌟送菌液会略微久一些，是第二天下午4点出结果～总之就是效率蛮高的！