我的做法是：裁膜各自孵育一二抗，然后分开曝光，保存后拼在一起再同时曝光一次，也可以先在期刊上看看已经发表的杂志的原始数据是怎样的。
裁膜各自孵育没啥可说的，按正常操作即可；
[猪头R]但是把膜拼在一起同时曝光容易出现一个情况就是：第一张膜曝出后，另一张没显示信号，或者过曝黑一片，比如图2那样…
这是因为：蛋白丰度不同，或者一抗效价差距大，以及最后发光信号不一样。
遇到这种情况我们怎么操作可以得到图1的那种原始数据呢❓❓❓同时曝光，每个条带都可以显现出来！
因为所有目的蛋白和内参都是同一组样品，所以蛋白浓度是固定的，裁膜拼膜也不是跑平行胶。
解决方法只能从这两个步骤去下手：
[一R]检查一抗效价，调整稀释比例
比如内参蛋白本来细胞和组织内含量就高，一抗稀释比例再高，信号直接盖过所有。
内参一般为1:20000稀释，甚至可以1:40000，目的蛋白根据实际情况调整，一般为1:500～1:5000。蛋白丰度高就调高稀释比例，丰度低就降低！可以先做预实验去调整～
[二R]调整好一抗比例孵育后，第二个优化的点就是发光。
裁开的膜先分别曝光，用每个蛋白各自最合适的时间曝，这样曝出来的就很合适放到figure里，然后保存原始数据。
[三R]拼膜合并曝光时，把曝光时间差别很大的先放一边（这个第二步就可以看到），把曝光时间差不多的放在一起曝光。
信号差异太大的，我们根据曝光时间的差距调整发光液的使用！！！
[向右R]方法：目的蛋白用超敏发光液，内参蛋白或者某些丰度很高的目的蛋白用普通发光液，我们用的是普利莱的ECL超敏发光液P1010，好用
目的蛋白用原始浓度的超敏发光液涮膜，内参采用普通发光液涮膜，然后把膜拼在一起再同时发光，这样大概率可以同时显出～
🌟普利莱ECL化学发光检测试剂选择参照：
➡️常规检测可以使用超敏发光液P1050；
➡️对于表达量较高的目标蛋白例如内参，使用普通发光液P1010就可以；
➡️对于低丰度难检测的，比如磷酸化蛋白，用灵敏度最高的飞克级发光液P1060！
如果目标蛋白丰度适中，不太推荐使用飞克级ECL极敏发光液，容易产生过曝“烧膜”现象！
