多发性内分泌肿瘤1型 (MEN1) 是一种罕见的常染色体显性遗传肿瘤综合征，其持续受到内分泌学、胃肠病学、外科、放射学、遗传学和分子生物学专家的广泛关注。过去 20 年中已发表了两篇重要的临床实践指导论文，最近一篇发表于 8 年前。此后，文献中出现了一些关于 MEN1 基本生物学和临床特征的新见解，本文将讨论这些数据。MEN1 编码蛋白 menin 与转化生长因子 β/骨形态发生蛋白、一些核受体、Wnt/β-catenin 和 Hedgehog 介导的细胞信号通路中的转录因子和染色质修饰蛋白之间的遗传和分子相互作用，以及在小鼠模型上的临床前研究，促进了对 MEN1 相关肿瘤发病机制和潜在药物干预的理解。基因诊断的进步为识别生殖系MEN1突变阴性患者的MEN1相关疾病提供了机会。关于儿童、青少年和妊娠期患者临床表现的知识正在迅速积累，这些知识可以转化为对这些极其脆弱患者的管理。关于散发性神经内分泌肿瘤基因和分子特征的发现，以及诊断工具和手术方法的进步，支持开展新型靶向疗法的临床试验。最后，对受MEN1及相关疾病影响的患者进行生活质量研究，代表着对该问题进行药物经济学解读的必要努力。鉴于研究在广泛领域和重点领域都取得了进展，这篇及时的综述将这些研究汇总并讨论。
《多发性内分泌肿瘤1型的发病原因及基因检测》关键词：MEN1、表型模拟、menin、突变阴性、神经内分泌肿瘤、表观遗传学、小鼠模型、药物治疗、手术方法、生活质量
图形摘要
发现的受menin调控的通路为多发性内分泌肿瘤1型（MEN1）的新型治疗干预开辟了新的机会
MEN1 基因诊断使得针对基因阳性和阴性患者进行区别治疗成为可能。
敏感领域，例如青少年和怀孕期间的 MEN1 临床过程，可以通过重视积累的经验进行临床管理
MEN1 相关胰腺神经内分泌肿瘤的发病机制及其对患者管理的影响得到了更深入的了解
手术和药物治疗为 MEN1 的临床治疗带来了更光明的前景
多发性内分泌肿瘤 1 型 (MEN1) 或 Wermer 综合征 (OMIM *131100) 是一种罕见的（患病率为 3-20/100 000）高渗透性的常染色体显性遗传病，由肿瘤抑制基因MEN1 的种系突变引起，该基因编码 610 个氨基酸的蛋白质 menin 。患者被诊断患有 MEN1 对其家庭成员具有重要意义，因为一级亲属患该综合征的风险为 50%，并且可以通过MEN1突变分析识别出来。尽管作为一种常染色体显性遗传病，MEN1 不会出现性别二态性，但有报道称女性患病率较高，但这些结果的含义可能需要进一步验证。MEN1 所有临床特征的年龄相关渗透率在 20 岁时超过 50%，在 40 岁时超过 95%。此外，也有报道称，由于创始人效应而出现地理聚集的情况。
MEN1 的特征是 20 多种内分泌和非内分泌肿瘤的不同组合，这些肿瘤在 11q13（MEN1基因所在位点）上发生杂合性缺失 (LOH)，导致MEN1双等位基因缺失（图 1）。内分泌肿瘤的表现形式可能是激素分泌过剩或肿瘤本身生长。临床上，若同时出现以下两种或两种以上的典型内分泌疾病，则可怀疑该病：甲状旁腺增生导致的原发性甲状旁腺功能亢进症 (PHPT)、垂体前叶肿瘤和十二指肠胰腺神经内分泌肿瘤 (DP-NET)。其他MEN1相关肿瘤包括胸腺和肺神经内分泌肿瘤（NET）、2型胃神经内分泌肿瘤（NET）、肾上腺皮质肿瘤、嗜铬细胞瘤、面部血管纤维瘤、胶原瘤、冬眠瘤、脑膜瘤、室管膜瘤、平滑肌瘤和脂肪瘤，以及女性患者罹患乳腺癌的风险增加( 9-12 )。与MEN1相关的罕见肿瘤，如类癌瘤、乳腺癌、甲状旁腺癌( 13 )或肾上腺皮质癌，是MEN1患者死亡的原因。
图 1.与 MEN1 相关的肿瘤。
MEN1 患者的预期寿命较短，而由于肿瘤的多发性和侵袭性，散发性内分泌肿瘤患者的治疗效果不如散发性内分泌肿瘤患者。在出现症状之前检测出肿瘤并进行针对性治疗可显著改善预后。要实现这一目标，只有由多学科 MEN1 专家团队为 MEN1 患者和家属提供临床护理，即由真正的常设工作组全心全意致力于这种疾病，正如 2012 年发布的最新指导报告所建议的那样。在过去 8 年中，已发表了多项重要发现，涉及 MEN1 的基因诊断、散发性内分泌肿瘤的遗传学、MEN1 相关疾病、menin 的生物学功能、潜在的药物疗法、疾病发病机制、外科手术进展以及 MEN1 的临床病程和预后。因此，针对这些最新发现进行审查对于基础科学研究人员和临床医生了解 MEN1 的分子基础以及 MEN1 患者的管理无疑是及时和有用的。
关于MEN1编码蛋白Menin的新发现及其功能表征Menin 是MEN1基因的蛋白质产物，由 610 个氨基酸组成（menin 异构体 2，NCBI 参考序列：NM_130799.2）。menin 有一个非常罕见的次要异构体（menin 异构体 1，NCBI 参考序列：NM_000244.3），它来自外显子 2 下游 15 bp 处的潜在可变剪接位点，该位点插入 5 个氨基酸残基（在 148 个氨基酸之后）。在基因和蛋白质数据库中，通常将最长的转录本指定为主要异构体；因此，有时 menin 被描述为 615 个氨基酸的蛋白质。
所有关于menin及其突变体的研究均采用610个氨基酸异构体进行，因为罕见的615个氨基酸异构体在任何细胞类型中均未观察到。67 kDa的menin广泛表达，其C末端含有2个核定位信号(NLS)（NLS1: 479-497和NLS2: 588-608）和1个辅助NLS（aNLS: 546-572）。因此，根据使用绿色荧光蛋白标记的menin、免疫荧光和亚细胞级分Western印迹分析的实验结果，menin可在细胞核中检测到。 Menin的翻译后修饰包括Ser394、Thr397、Thr399、Ser487、Ser543和Ser583位点的磷酸化、SUMO化和棕榈酰化，这些修饰可能增强或抑制menin在细胞核中作为肿瘤抑制因子的作用或其与细胞膜的潜在结合。这些翻译后修饰的功能性贡献尚未在MEN1相关内分泌细胞类型或临床背景下进行研究。
在删除一个预测为非结构化（氨基酸残基 460-519）的单个内部环区域后，人类 menin（蛋白质数据库编号 3U84）的三维（3D）晶体结构已被成功破译。menin 的 3D 结构类似于“弯曲的左手”，“拇指”和“手掌”形成一个口袋。该结构由 4 个结构域组成：一个长的 β 发夹N端结构域、一个转谷氨酰胺酶样结构域（“拇指”）、一个含有 3 个四肽基序的螺旋结构域（“手掌”），然后是一个C端结构域（“手指”）（图 2 ）。“拇指”和“手掌”形成的口袋或腔已被证实可以促进蛋白质 - 蛋白质相互作用。
图 2.人类menin单独或与相互作用蛋白共同作用的三维晶体结构。A，menin结构显示存在一个用于蛋白质-蛋白质相互作用的口袋/腔体（蛋白质数据库；PDB ID 3U84）。menin的不同结构域以颜色编码：“ N端”为浅绿色（1-101），“拇指”为绿青色（102-230），“棕榈”为橄榄绿色（231-386），“手指”为深绿色（387端）。B，menin与JUND的menin结合基序（MBM）相互作用的结构（氨基酸27-47，紫色）（PDB ID 3U86）。C，menin与MLL1的MBM相互作用的结构（氨基酸6-13，金色）（PDB ID 3U85）。 D，menin 与 LEDGF（氨基酸 347-435，红色）和 MLL1（MBM-LEGDF 结合基序 [LBM]，氨基酸 6-153，金色）相互作用区域的三元复合物 (PDB ID 3U88)。为了便于结晶，删除了以下区域（图中所示结构中不存在）：menin 中的非结构化环（氨基酸 460-519）、JUND-MBM 中的短片段（氨基酸 40-45）以及 MLL1-MBM-LBM 中的两个环区域（氨基酸 16-22 和 36-102）。结构图像由 PyMOL（Schrodinger Inc；https://pymol.org）生成。
Menin 在 MEN1 中的抑癌作用以及 MEN1 相关肿瘤的组织局限性模式已在小鼠模型中得到验证。Men1 种系纯合敲除( Men1 -/– )在胚胎 11.5 至 14.5 时会导致胚胎致死，而Men1种系杂合敲除( Men1 +/– ) 可产生可存活的小鼠，这些小鼠在年龄 > 12-15 月龄时会在胰岛（主要为胰岛素瘤）、垂体前叶（主要为催乳素瘤）和甲状旁腺（主要为增生）中形成激素高分泌肿瘤。与 Menin 在人类 MEN1 肿瘤中的抑癌作用一致，对非靶向Men1拷贝的二次打击导致的杂合性缺失 (LOH) 是Men1 +/–小鼠肿瘤形成的关键。Men1 +/–小鼠的胰岛在Men1基因座杂合性缺失(LOH) 发生之前表现出肿瘤前增生和发育不良阶段。研究这些肿瘤前事件的分子机制，有助于理解肿瘤的发生和发展，以及组织特异性 Menin 单倍体不足和 Menin 缺失的机制。
两种条件性小鼠模型已证实menin的肿瘤抑制作用具有组织特异性。首先，肝脏中menin条件性缺失的小鼠（Men1 f/f；ALB-Cre）不会在肝脏中形成肿瘤。其次，整个胰腺中menin条件性缺失的小鼠（Men1 f/f；PDX1-Cre）会形成源自内分泌胰腺β细胞（胰岛素瘤）的肿瘤，而不是源自任何外分泌胰腺细胞的肿瘤。有趣的是，分泌胰高血糖素的胰岛α细胞中menin条件性缺失的小鼠（Men1 f/f；GLU-Cre）不会形成胰高血糖素瘤，相反，它们主要形成β细胞肿瘤（胰岛素瘤）。有可能在menin丢失后，α细胞会转分化为β细胞，或者来自menin缺失的α细胞的旁分泌信号会诱导β细胞增殖 。正如预期的那样，甲状旁腺特异性Men1基因敲除小鼠（Men1 f/f ;PTH-Cre）会出现甲状旁腺增生和高钙血症，胰岛β细胞特异性Men1基因敲除小鼠（Men1 f /f ;RIP-Cre）会患上胰岛素瘤。由于垂体催乳细胞中RIP-Cre转基因的表达泄漏，Men1 f/f ;RIP-Cre小鼠也会患上催乳素瘤。与人类MEN1类似，小鼠（ Men1 +/–或Men1 f/f ;RIP-Cre）的催乳素瘤常见于雌性。然而，催乳素瘤性别差异的原因尚不清楚。尽管条件性Men1基因敲除小鼠的Men1杂合性缺失并不依赖于自发的二次打击，但肿瘤在胚胎menin缺失后8至10个月才会形成，而肿瘤形成延迟的原因尚不清楚。
由于缺乏与已知蛋白质的相似性、缺乏明显的功能基序/结构域、缺乏正常或无menin的内分泌细胞系、缺乏MEN1肿瘤或其对应正常组织（类器官或患者来源的异种移植[PDX]）的离体模型，menin的功能表征遇到了各种挑战。通过鉴定与MEN1相关组织无关的细胞类型中menin的相互作用伙伴，随后在转化研究中验证一些相关靶点，人们深入了解了menin如何发挥其肿瘤抑制活性。尽管menin的序列没有揭示任何功能属性，但与50多种已知功能的不同蛋白质的直接或间接相互作用有助于提供有关其在各种过程和途径中的作用的线索：细胞粘附、细胞周期进程、细胞分裂、细胞运动、细胞信号传导、细胞骨架结构、DNA修复、基因组稳定性和转录调控。在menin的相互作用伙伴中，转录因子和表观遗传调控因子含量丰富。menin是一种多功能蛋白，在转录调控中作为辅激活因子或辅抑制因子发挥着重要作用。
Menin在转录调控中的功能贡献Menin 与各种转录因子和染色质修饰蛋白的相互作用已证明在由转化生长因子 β (TGF-β)/骨形态发生蛋白 (BMP)、核受体、Wnt/β-catenin 和 Hedgehog (Hh) 介导的细胞信号通路中具有显著的功能性贡献。这些信号通路刺激转录因子募集到其同源 DNA 结合位点以调节基因表达。Menin 与 SMAD3 或 SMAD1/SMAD5 相互作用以促进它们的转录活性，而这些相互作用中 Menin 的缺失分别抑制 TGF-β 和 BMP 信号通路，从而拮抗它们的增殖抑制作用。核受体是通过与类固醇激素等配体结合而激活的转录因子。已证明 Menin 可作为某些核受体 (AR、ERα、LXRα、PPARα、PPARϒ、RXR 和 VDR) 介导的基因表达的共激活因子，并且这些相互作用中 menin 的缺失预示着影响细胞生长和功能的特定核受体信号传导受到抑制。相反，menin 与 β-catenin 及其相关转录因子 TCF3 和 TCF4 相互作用以抑制其活性，而 menin 的缺失会促进已知可增加胰岛 β 细胞增殖的 Wnt/β-catenin 信号传导。Menin 与 PRMT5 相互作用，通过沉积 PRMT5 依赖的抑制性组蛋白修饰 (H4R3me2s) 来拮抗 Hh 信号传导，从而抑制 Hh 信号通路中基因的表达，即GAS1和GLI1。这些基因中 menin-PRMT5 介导的抑制标记的缺失将促进 Hh 信号传导，从而上调细胞增殖。
在调节各种刺激下游基因表达的AP1 JUN转录因子家族（JUNB、cJUN和JUND）中，menin仅与JUND相互作用并抑制其转录活性。JUND的menin相互作用区域位于其N末端。JUND该区域（人类JUND氨基酸残基33-36）的合成突变可破坏与menin的相互作用。此类缺乏menin相互作用的JUND突变体具有致癌性，因为它们会促进细胞增殖，这与menin-JUND相互作用的抑癌作用相一致。
Menin 与 DAXX（一种转录阻遏物和染色质重塑复合物的组成部分）和 SUV39H1（一种组蛋白甲基转移酶，可沉积抑制性组蛋白修饰 H3K9me3）相互作用，从而抑制与调节细胞增殖相关的特定基因的转录：MME、GBX2和IL6。
H3K4me3 是一种组蛋白修饰，主要位于转录起始位点附近的启动子区域，用于激活基因转录。在负责沉积此组蛋白标记的 MLL 家族成员中，menin 与两种组蛋白甲基转移酶 MLL1 (KMT2A) 和 MLL2 (KMT2B) 相互作用。MLL1 和 MLL2 是包含 ASH2L、hDPY30、HCF-2、RBBP5 和 WDR5 的多亚基蛋白复合物的一部分，它们还与 RNA-Pol-II (POLR2B) 的 140 kDa 亚基相互作用。该蛋白复合物中 menin 的缺失会导致特定基因的转录抑制，这是由于转录起始位点附近启动子区域基因特异性的 H3K4me3 缺失所致。
menin 的 3D 结构显示出一个中心腔，形成一个用于蛋白质相互作用的结合口袋，但没有明显的 DNA 结合域，这表明为了控制基因表达，menin 并不直接与 DNA 结合，而是依赖于其与转录调控机制组成部分的相互作用 。menin与来自 JUND 或 MLL1 相互作用区域的肽的共结晶表明，它们与 menin 口袋区域的结合是互斥的（见图2）。有趣的是，JUND 和 MLL1 的 menin 结合肽在与 menin 结合至关重要的 5 个残基上几乎相同。此外，menin 与晶状体上皮衍生生长因子 (LEDGF) 肽（氨基酸 347-429）和 MLL1（氨基酸 6-153，含有 menin 结合和 LEDGF 结合基序）的共结晶表明，menin 与 MLL1 之间的相互作用创建了一个结合 LEDGF 的界面，LEDGF 是一种将 MLL 复合物引导至染色质的蛋白质（见图2）。对 menin 与其他相互作用伙伴进行类似的结构研究可能有助于确定 menin 如何与单个因子一对一相互作用或同时与多个因子相互作用以控制转录调控。
脑膜蛋白靶基因的特征及其在细胞增殖中的作用使用 Menin 抗体通过染色质免疫沉淀结合 DNA 微阵列芯片 (ChIP-chip) 或结合下一代测序 (ChIP-seq) 等技术或染色质占据率系列分析等技术对靶基因进行全基因组分析表明，menin 定位于启动子区附近和基因组其他区域的数百个基因中 ( 35 , 43 , 44 )。尚未确定这些基因中的全部或部分是否与 menin 作为肿瘤抑制因子的作用相关。Scacheri 等人在研究中确定的一个靶基因是Hlxb9 / Mnx1，它编码负责胰岛 β 细胞分化的胚胎转录因子 ( 43 )。他们将人类胰岛中 menin 占据率的 ChIP-chip 数据与 15 周龄和 25 周龄野生型 (WT) 或 menin 缺陷型 ( Men1 f/f ;RIP-Cre ) 小鼠胰岛的基因表达数据进行了比较。Hlxb9是少数几个既与 Menin 结合，又在 Menin 缺失的胰岛中表达发生改变的基因之一。Hlxb9 在 Menin 缺失的胰岛中表达较高。这一发现支持了以下观点：MEN1 相关肿瘤的组织特异性可能与 Menin 对胰岛 β 细胞中组织特异性靶基因（例如Hlxb9 ）的调控有关。后续研究表明，一些 β 细胞分化因子（Foxa2、Nkx2.2、MafA、MafB 和 Hlxb9）存在 Menin 依赖性调控 ( 45-48 )。
鉴于 MLL 复合体中的 menin 与染色质中 H3K4me3 的沉积有关，另一种表征 menin 靶基因的方法是通过 ChIP-chip 或 ChIP-seq 结合互补 DNA (cDNA) 微阵列分析野生型 (WT) 和 menin-null 细胞的 H3K4me3 谱，以检测差异基因表达。这种方法在 WT 和 menin-null 小鼠胚胎干细胞中鉴定出长非编码 RNA Meg3 是作为肿瘤抑制因子起作用的 menin 靶基因，据报道，在人类散发性垂体腺瘤中 MEG3 表达缺失 ( 49-51 )。对 WT 或 menin-null 小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF) 以及由 WT 或 menin-null 小鼠胚胎干细胞体外分化而来的胰岛样内分泌细胞进行的类似分析表明，Hox基因是 menin的靶点 ( 42,49 )。Menin 缺失会抑制Hox基因的表达。 Hox基因编码胚胎发育和组织稳态所必需的转录因子，据报道，它们的异常表达存在于各种癌症类型中。
细胞周期是menin缺失后可能失调并促进肿瘤细胞增殖的明显过程之一。参与细胞周期进展、维持和调节的各种蛋白质包括细胞周期蛋白、细胞周期蛋白依赖性激酶 (CDK)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 (CDKI) 以及肿瘤抑制因子 p53 和 RB。使用 menin 缺失型 MEF 的研究表明，与野生型 MEF 或重建 menin 表达的 menin 缺失型 MEF 相比，menin 缺失型 MEF 从 G0/G1 期进展至 S 期的速度加快，2 个 CDKI 基因Cdkn2c (p18) 和Cdkn1b (p27) 的表达降低，Cdk2 活性增强。类似地，与野生型小鼠的胰岛相比，在Men1 +/–小鼠的胰岛肿瘤中以及在急性Men1缺失（Men1 f/f ；Cre-ER 喂养他莫昔芬）的增生胰岛中也观察到 p18 和 p27 表达降低，而Cdk4 表达升高。在Men1 +/–背景下，在这些细胞周期基因（Rb1、Tp53 、Cdk2、Cdk4、Cdkn2c和Cdkn1b）敲除的小鼠模型中，进一步研究表明，p18失活和 Cdk4 激活可能对 Menin 缺失后的胰岛肿瘤形成至关重要（表 1）。
表 1.用于研究menin丢失功能相互作用的小鼠模型常规双淘汰赛Men1 +/–基因型表型（胰岛肿瘤发生）Men1杂合缺失Rb1 +/–与Men1 +/–类似是的TP53 +/–与Men1 +/–类似是的Cdkn2c –/–加速不Cdkn1b –/–与Men1 +/–类似是的Cdk2 –/–与Men1 +/–类似是的Cdk4 –/–无肿瘤（ Cdk4 –/–导致的胰岛和垂体发育不全）不双敲除，β 细胞中条件性 menin 缺失 ( Men1 f/f ;RIP-Cre)基因型表型（胰岛肿瘤发生和存活）Pten 基因加速肿瘤发生并缩短寿命Kmt2a 雌雄同体加速肿瘤发生并缩短寿命Kdm5a f/f减少肿瘤发生并延长生存期Ctnnb1 f/f减少肿瘤发生并延长生存期抑制蛋白 –/–对肿瘤发生没有影响但延长生存期致癌KRas突变体，伴有 β 细胞条件性menin缺乏症 ( Men1 +/f ;RIP-Cre )基因型表型（P5新生儿胰岛）KRas (G12D)KRas（G12D）表达增强而不是抑制β细胞增殖a 参考文献在正文中引用。
尽管与 MEN1 相关肿瘤细胞增殖相关的各种转录因子相互作用的 menin 特定靶基因的全部范围仍有待确定，但小鼠模型中的转化研究表明，Men1与Pten、Kmt2a（Mll1）、Kdm5a（Rbp2）、Ctnnb1（β-catenin）、Inhbb（激活素-B）或致癌基因Kras之间的遗传相互作用在胰岛肿瘤和 β 细胞增殖中的重要性（见表1）。在 β 细胞特异性 menin 缺失（Men1 f/f；RIP-Cre）的小鼠中对这些基因进行组合遗传操作表明，Pten或Kmt2a的缺失会加速胰岛肿瘤的形成并降低存活率，Ctnnb1或组蛋白去甲基化酶（Kdm5a）的缺失会降低胰岛肿瘤的形成并延长存活率，Inhbb的缺失不会影响肿瘤的形成但会延长 10 个月后的存活率，而活化的Kras（G12D）的表达会增强而不是抑制 β 细胞增殖。
一种尚未被探索的方法来识别肿瘤中menin丢失的失调靶基因，即对MEN1相关肿瘤细胞及其对应正常细胞进行单细胞RNA测序分析。
Menin 作为 MLL 重排白血病中的促癌因子的意外作用及其潜在的治疗应用Menin 与 MLL1 相互作用的发现揭示了 Menin 作为 MLL 融合蛋白的致癌辅助因子的惊人功能性贡献，而 MLL 融合蛋白可驱动一种侵袭性白血病 。10 % 的急性白血病患者存在 11q23 染色体上的MLL1 / KMT2A基因染色体易位， MLL1 的N端与 80 多个不同融合伴侣的C端融合。最常见的易位是 t(4,11)(q21;q23)、t(9,11)(p21;q23) 和 t(11,19)(q23;p13)，导致 MLL-AF4、MLL-AF9 和 MLL-ENL 融合蛋白的表达。 MLL 重排（MLLr）白血病是急性髓细胞白血病（AML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）的一个独特亚群，影响儿童和成人。
MLL1 是维持HOX家族基因表达所必需的，而 HOX 家族基因负责调节正常的造血分化。致癌 MLL 融合蛋白会导致急性白血病，因为它们会上调HOX基因（包括HOXA7、HOXA9和 HOX 辅因子MEIS1）的表达，而 MEIS1 可增强造血干细胞增殖并阻止造血分化。驱动 MLLr 白血病的 MLL 融合保留了 MLL 中与 Menin 相互作用的部分，而 Menin 与 MLL 融合蛋白的相互作用对于维持 MLL 融合驱动的基因表达程序至关重要 。因此，利用小分子阻断 MLL 在 Menin 中央腔/袋中的相互作用，提示这可能是治疗 MLLr 白血病的重要治疗策略。多年来，通过结构优化的化学设计，已开发出几种 menin-MLL 相互作用的小分子抑制剂，这些抑制剂具有更高的效力和特异性，可口服生物利用，且药物特性得到改善。这些抑制剂已在各种实验模型系统中进行了测试，在这些系统中，它们可以阻断造血干细胞增殖并促进分化——MLLr 白血病小鼠模型、患者来源的白血病细胞系以及这些细胞系和人类原代白血病细胞的 PDX 模型。这些研究的良好结果已转化为两种化合物正在进行的 1 期和 2 期临床试验：Kura Oncology (KO)-539，MI-3454 ( NCT04067336 ) 的结构类似物，以及 Syndax (SNDX)-5613，VTP-50469 ( NCT04065399 )的近似类似物。这些化合物还能阻断menin与WT MLL的相互作用，表明其在非MLLr白血病中具有治疗作用。在非MLLr白血病小鼠模型中，AML的发展依赖于核仁磷蛋白( NPM1 )基因突变（见于30%的AML患者），VTP-50469在白血病前期AML细胞中引发了细胞毒作用，表明其具有预防性治疗的潜力。
Menin-MLL 相互作用抑制剂也在实体肿瘤实验模型中进行了测试，其中 Menin 已被证明可作为促癌辅助因子来阻断 Menin 和 WT MLL 之间的相互作用。较早的 Menin-MLL 抑制剂 MI-2 已被证明可以抑制组蛋白 H3.3(p.Lys27Met) 突变的儿童神经胶质瘤的肿瘤细胞生长。另一种 Menin-MLL 抑制剂 MI-503 的抗肿瘤作用已在去势抵抗性前列腺癌、尤文氏肉瘤和肝细胞癌中得到证实。menin-MLL 相互作用抑制剂在 MEN1 相关肿瘤细胞中的效用可能无关紧要，因为 Menin 在 MEN1 的背景下充当肿瘤抑制因子，并且肿瘤表现出双等位基因 Menin 的丢失或失活。然而，这些抑制剂尚未在保留野生型menin的散发性内分泌肿瘤或携带特定menin错义突变且保留与MLL相互作用（且无MEN1 LOH）的散发性肿瘤中进行测试。此类肿瘤的实验模型将有助于确定menin-MLL相互作用抑制剂是增强还是抑制内分泌肿瘤细胞的增殖。
Menin 在非MEN1 靶组织中作为肿瘤抑制因子的作用大约 45% 至 50% 的BRAF突变阳性结直肠癌显示 WNT 通路的异常调节。在最近的一项研究中， 4% 的BRAF突变型结直肠肿瘤样本中检测到了MEN1基因密码子 R516（根据 Menin 亚型 1，为 R521）的体细胞失活热点突变。这些数据支持 Menin 在结直肠组织中作为肿瘤抑制因子的作用，并为结直肠癌的病理增加了另一个 WNT 通路相关基因，因为已经证明 Menin 参与了 WNT 通路的调节。在另一项近期研究了散发性骨肉瘤（恶性骨肿瘤）患者的种系易感性时，在欧洲血统的患者中观察到MEN1基因致病/可能致病变异的频率高于预期（0.5%）。这些发现对骨肉瘤患者的基因检测具有重要意义，并提示menin在骨骼中可能发挥抑癌作用。然而，MEN1患者中尚未发现成骨癌的报道。
MEN1相关内分泌肿瘤发生发展中的表观遗传调控DNA 缠绕在组蛋白八聚体上，该八聚体由 4 个核心组蛋白（H2A、H2B、H3 和 H4）各 2 个拷贝组成，形成核小体，即染色质的基本单位。DNA 和组蛋白的表观遗传修饰可导致染色质结构闭合或开放，从而控制转录机制的进入以及 DNA 复制和修复等其他过程。各种表观遗传因子形成多蛋白复合体（其中可能还包含长链非编码 RNA），作为酶或辅助因子，“写入”、“读取”或“擦除”DNA 和组蛋白上的修饰。DNA 修饰包括甲基化、羟甲基化和进一步的氧化。组蛋白的翻译后修饰被称为组蛋白“标记”，包括甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化和其他修饰。精确调控这些表观遗传修饰及其调控机制对于预防可能导致肿瘤和其他疾病的细胞异常增殖和功能至关重要。由于表观遗传修饰可以被写入、读取和擦除，因此，利用能够阻断或增强酶活性或表观遗传调控因子关键相互作用的药物，可以将异常的表观遗传改变恢复到正常状态，从而为治疗提供了机会。
MEN1相关肿瘤的表观遗传事件据报道，MEN1 相关肿瘤存在各种表观遗传学改变（图 3）。menin 与组蛋白修饰蛋白的相互作用，特别是与负责写入组蛋白标记 H3K4me3 的蛋白质复合物中的组蛋白赖氨酸甲基转移酶 (KMT) MLL1/KMT2A 和 MLL2/KMT2B 的相互作用，支持了表观遗传调控在 MEN1 肿瘤中发挥作用的证据。组蛋白甲基转移酶甲基化核小体突出氨基酸链（组蛋白尾）中的赖氨酸或精氨酸残基。组蛋白 H3 可以在 4、9、27、36 和 79 位赖氨酸残基上发生甲基化，甲基化基团数量为 1、2 或 3 个。基因表达的激活或沉默受特定组蛋白H3赖氨酸残基的甲基化或去甲基化水平调控。H3K4me3是活跃转录基因的标记，而H3K9me3和H3K27me3与转录沉默相关。特定的赖氨酸去甲基化酶（KDM）可以消除H3K4或H3K9的单甲基化、去甲基化或三甲基化，例如赖氨酸特异性去甲基化酶1（LSD1/KDM1A）、赖氨酸特异性去甲基化酶2（LSD2/KDM1B）和Jumonji AT-rich相互作用结构域1A（JARID1A/KDM5A/RBP2）。
图 3.多发性内分泌肿瘤1型 (MEN1) 相关肿瘤的表观遗传调控示意图。左侧显示正常细胞中的表观遗传修饰。中间显示肿瘤中menin缺失后观察到或预测到的异常表观遗传变化。右侧显示异常表观遗传变化的后果。绿色和红色分别表示特定组蛋白或DNA表观遗传修饰的性质、基因表达的活性或抑制性标记。带有斜线的空心黑色椭圆表示该组蛋白标记的缺失。端粒替代延长 (ALT) 在肿瘤中被激活，而在正常细胞中不存在（用带有斜线的蓝色空心椭圆表示）。未显示 miR-24 介导的表观遗传调控。
在β细胞特异性menin缺失的小鼠（Men1 f/f ;RIP-Cre）中，H3K4me3在MEN1相关胰岛肿瘤中的表观遗传调控已被探索。在2月龄Men1 f/f;RIP-Cre和对照RIP-Cre小鼠的胰岛中，已检测了基因激活标记H3K4me3及其对应隐性标记H3K27me3的全基因组分布（75）。抗H3K4me3免疫组织化学检测显示，与对照胰岛相比，menin缺失的胰岛中H3K4me3的整体/总水平没有显著变化。在 menin-null 胰岛中，H3K4me3 的丢失与特定基因组内的 H3K27me3 的获得相关，并且与对照胰岛相比，此类基因的表达显着降低，特别是编码胰岛素样生长因子 2 信使 RNA 结合蛋白 2（Igf2bp2）的基因。有趣的是，在 menin-null 胰岛中，改变的表观遗传标记（H3K4me3 的丢失和 H3K27me3 的获得）和 Igf2bp2 的表达降低可以通过同时删除 H3K4me3 去甲基化酶 Rbp2（Men1 f/f；Kdm5a f/ f；RIP-Cre）来逆转。抗 H3K4me3 免疫组织化学显示，与对照胰岛相比，menin-Rbp2-null 胰岛中 H3K4me3 的整体/总体水平没有显着变化。 β细胞特异性menin和Rbp2联合缺失的小鼠胰岛肿瘤形成率降低，生存期延长。因此，由于menin缺失而发生的特定表观遗传学改变是可以逆转的（通过去除Rbp2组蛋白去甲基化酶），而将表观遗传学改变恢复到基础正常状态也可以减少肿瘤形成。
人们已研究了 Menin 与精氨酸甲基转移酶 PRMT5 相互作用对 MEN1 相关胰岛肿瘤细胞增殖的表观遗传调控，PRMT5 会沉积抑制性组蛋白标记 H4R3me2s。在 MEF 中，menin 与 PRMT5 共同抑制Gas1基因的表达，而 Gas1 基因参与 Hh 信号通路的激活。GAS1 是 Sonic Hedgehog 配体与其受体 PTCH1 结合以刺激 Hh 信号传导所必需的。因此，在 menin 缺失的肿瘤中，GAS1 抑制会被解除，从而激活 Hh 信号传导。使用 Hh 抑制剂 GDC-0449 对 8 月龄Men1 f/f ;RIP-Cre 小鼠治疗 4 周，可使胰岛 β 细胞增殖减少约 60%。但尚未研究其对肿瘤大小和总体生存率的影响。这项研究表明，阻断由于menin依赖性表观遗传标记的丢失而导致的异常信号传导可以抑制细胞增殖。
在MEN1相关胰岛肿瘤中研究的另一种组蛋白修饰是与活性转录相关的组蛋白乙酰化。组蛋白尾部赖氨酸残基上的乙酰化标记由组蛋白乙酰转移酶 (HAT) 沉积，并由溴结构域和额外末端 (BET) 蛋白中的溴结构域读取。JQ1 是一种小分子抑制剂，可抑制溴结构域与乙酰化组蛋白的相互作用。给30周龄的Men1 f/f ;RIP-Cre小鼠每周注射两次JQ1，持续1个月，可使肿瘤中胰岛β细胞的增殖率降低49%至55%，并显著增加细胞凋亡。本研究未评估其对肿瘤大小和总生存期的影响。尽管尚未研究 MEN1 相关肿瘤中组蛋白乙酰化的具体表观遗传变化，但这项研究强调了针对组蛋白乙酰化标记的潜力。
一些研究调查了 MEN1 相关肿瘤中的 DNA 甲基化，这是一种 CpG 位点的表观遗传修饰，尤其是在基因启动子区域。DNA 高甲基化通常与基因沉默同时发生。此外，H3K4me3 已被证实可以保护 CpG 岛免于 DNA 甲基化，从而调节基因转录。可以通过直接抑制建立、增殖和维持 DNA 甲基化标记稳定性的 DNA 甲基转移酶 (DNMT) 来阻断 DNA 甲基化。在部分 MEN1 肿瘤中检测到了 DNA 高甲基化。在 MEN1 患者的甲状旁腺肿瘤和无功能性胰腺神经内分泌肿瘤 (pNET) 中检测到了整体 DNA 高甲基化。此外，在 MEN1 相关的晚期 pNET 中，启动子高甲基化是一个常见事件。在 RIP-TVA 小鼠中使用体细胞基因转移系统，DNMT1 的表达增加了 β 细胞增殖，这表明 DNMT1 可以作为抑制 DNA 高甲基化和 β 细胞增殖的靶点。
已对 MEN1 相关的 pNET 进行了端粒长度评估。端粒是保护染色体末端的特殊染色质结构。端粒替代性延长 (ALT) 是一个端粒酶独立的过程，在癌细胞中被激活，以防止体细胞正常增殖过程中伴随的端粒缩短。ALT 与预后的相关性在不同类型的癌症中有所不同。染色质重塑基因死亡结构域相关蛋白 ( DAXX ) 和 X 连锁 α-地中海贫血/智力低下 ( ATRX ) 的突变与散发性 pNET 中的 ALT 激活相关。一项关于无功能性 pNET 的研究表明，48% 的散发性 pNET 和 25% 的 MEN1 相关 pNET 为 ALT 阳性，且 ALT 与疾病复发相关。
非编码RNA (ncRNA) 介导的基因沉默是另一种在MEN1相关肿瘤中被研究的表观遗传机制。ncRNA有两种类型：短ncRNA（少于30个核苷酸）和长ncRNA（大于200个核苷酸）。microRNA是在转录和转录后水平调控基因表达的短ncRNA。在8周龄Men1 f/f ;RIP-Cre小鼠的增生胰岛和人类甲状旁腺肿瘤中，miR-24（及其未成熟形式miR-24-1）已被证实靶向menin，因为miR-24水平升高与menin水平降低相关。这种沉默menin的机制可能也导致了在MEN1相关肿瘤中MEN1失活的第二次体细胞“打击”，而这些肿瘤在MEN1基因座上没有表现出LOH。
探索表观遗传诊断和治疗选择表观遗传改变在肿瘤中较为稳定，因此可用作诊断标记。此外，表观遗传改变是可逆的，可以通过靶向治疗恢复正常的表观遗传状态，例如通过阻断表观遗传调控因子的酶活性、破坏染色质修饰蛋白复合物中的特定相互作用、干扰表观遗传标记的读取，或靶向降解特定表观遗传因子。
在Men1 f/f ;RIP-Cre 小鼠或人类肿瘤样本中，MEN1 相关肿瘤存在表观遗传学改变，这表明可将表观遗传学改变作为此类肿瘤诊断和治疗选择的生物标记物。MEN1 相关肿瘤中可能发生的表观遗传学改变包括：一部分基因中活性组蛋白标记 H3K4me3 的丢失、一部分基因中抑制性组蛋白 H3K27me3 的获得、由于Gas启动子区抑制性组蛋白标记 H4R3me2s 的丢失而导致的 Hh 信号增强、组蛋白乙酰化、DNA 高甲基化、ALT 和微小 RNA 介导的 menin 表达沉默（图 3）。DNA、组蛋白和 ALT 的表观遗传学改变是否同时发生在 MEN1 相关肿瘤中尚未研究。
实验证据表明，去甲基化酶Rbp2的缺失可逆转Men1 f/f ;RIP-Cre肿瘤中组蛋白甲基化的变化，这表明利用表观遗传药物抑制MEN1相关肿瘤中的该去甲基化酶存在治疗潜力。同样，BETi (JQ1) 可降低Men1 f/f ;RIP-Cre肿瘤中的细胞增殖，这表明靶向组蛋白乙酰化可作为MEN1相关肿瘤的潜在表观遗传治疗选择。
晚期肿瘤 DNA 的表观遗传变化可以通过血液和血清样本中的循环游离 DNA (cfDNA) 来测量。由于肿瘤中的表观遗传变化稳定，且 cfDNA 样本获取无创，因此这种潜在的诊断检测 (cfDNA 液体活检) 正在针对各种癌症进行探索，但尚未在临床环境中应用于任何类型癌症的治疗。针对肿瘤 DNA 高甲基化的治疗选择包括 DNA 低甲基化药物、地西他滨和氮胞苷，它们针对 DNA 甲基化酶。这些药物已被美国食品药品监督管理局批准用于治疗特定的血液系统恶性肿瘤，并可在表现出 DNA 高甲基化的 MEN1 相关肿瘤实验模型中探索作为潜在的治疗选择。
端粒特异性荧光原位杂交技术已用于测定人类肿瘤样本中的ALT状态，并可作为组织活检的诊断检测方法。已有针对ALT的潜在疗法被提出。miR-24介导的野生型MEN1等位基因沉默在无11q13 LOH的人类甲状旁腺肿瘤中的结果可进一步研究，以开发基于RNA拮抗剂的策略，从MEN1基因的非突变拷贝恢复menin的表达，从而控制肿瘤发生。
表观遗传疗法的开发和应用仍面临诸多问题和挑战，例如在受影响组织中的细胞特异性靶向性、副作用、耐药性以及如何对靶点实现持续、一致和持久的作用。尽管有多种表观遗传药物正在临床试验中，但要将药物研发成果转化为人类患者，仍需克服这些挑战。
对MEN1进行基因解码所获得的新认识目前的生殖细胞系或体细胞MEN1基因检测包括DNA序列分析（用于筛查编码外显子和剪接点突变）和多重连接依赖性探针扩增（用于缺失/重复 (del/dup) 分析）以筛查更大范围的变异。自发现以来，MEN1基因检测已成为MEN1诊断和治疗的重要组成部分。MEN1基因筛查有助于确诊临床诊断、确定携带者以及早期监测肿瘤。此外，在存在临床和遗传性MEN1的家族中，MEN1基因检测阴性的亲属可以免于终身肿瘤监测的负担。
由来自国际中心的内科医生、外科医生、遗传学家和其他专家组成的专家小组制定的临床实践共识指南概述了对 MEN1 进行基因检测的建议。现行指南建议，患者在基因检测前后必须接受遗传咨询。关于哪些人应该接受检测，指南指出，应向以下人群提供检测：1) 临床 MEN1 的指示病例（表现为 2 个或以上 MEN1 相关内分泌肿瘤），2) 早在 5 岁之前患有 MEN1 基因的患者（已知的MEN1突变携带者）的无症状一级亲属，3) 患有 MEN1 基因的患者有症状的一级亲属，并表现为至少一种 MEN1 相关肿瘤，以及 4) 30 岁之前患有多腺体甲状旁腺疾病或甲状旁腺腺瘤的患者，以及任何年龄患有胃泌素瘤或多发性胰岛肿瘤的患者。
测序和缺失/重复分析可在70%至90%具有MEN1典型特征的家族中识别出杂合的MEN1种系突变。2015年对已发表的种系突变的回顾发现了576个独特突变，2019年，MEN1突变通用突变数据库（UMD-MEN1数据库）报告了另外181个独特种系突变。这757个独特的MEN1种系突变覆盖了整个编码区，没有热点。
明显致病的种系突变（69%）可预测 menin 的过早截短，包括无义突变（14%）、移码突变（42%）、剪接位点突变（10.5%）和大量缺失（2.5%）（图 4）。错义突变（25.5%）和一个或多个氨基酸的框内插入或缺失（indel）（5.5%）不能预测 menin 的明显失活，它们是良性还是致病性需要进一步研究。在多项研究和在家族成员中，通过分析突变类型或其位置与 MEN1 的临床表现，没有发现明确的基因型-表型相关性。同样，散发性肿瘤中的体细胞MEN1突变也没有发现任何热点或与特定肿瘤类型的明确基因型-表型相关性。
图 4.不同类型MEN1突变的百分比分布。无义突变、移码突变、剪接突变以及占突变总数69%的大量缺失可预测menin的明显失活。错义突变和框内插入或缺失（indel）突变被从饼图中切出，以指示这两类突变中可能存在意义不明的变异。
在出现符合MEN1临床特征的患者中，10%至30%未发现MEN1种系突变。这些MEN1突变阴性的患者可能携带当前基因检测方法无法检测的区域（例如非翻译区、内含子区和调控区）的MEN1种系突变，或肿瘤可能表现为体细胞嵌合体（合子后MEN1突变），或携带其他基因的种系突变（例如CDKN1B ），或多个肿瘤的临床表现是偶然发生的，没有潜在的种系突变。候选基因分析、全基因组测序（WGS）或全外显子组测序（WES）方法已被用于揭示MEN1突变阴性病例中的种系遗传缺陷。
MEN1错义突变的计算机分析MEN1基因检测的挑战之一是对错义突变和框内插入/缺失突变的解读，这些突变无法预测对蛋白质结构或功能的明显破坏性影响。鉴于menin是一种多功能蛋白，与多种蛋白相互作用，错义突变和框内插入/缺失突变可能以各种方式破坏menin的功能。然而，目前尚无可靠的功能分析来确定MEN1错义突变的影响。无需进行功能研究，即可通过计算机模拟预测工具评估氨基酸替换对蛋白质结构或功能的影响：SIFT（从耐受性中筛选不耐受基因）、PolyPhen-2（多态性表型分析V-2）、MutationTaster、MutationAssessor和其他类似工具。预测程序基于多种标准，例如序列同源性、替代氨基酸之间的物理化学相似性、进化保守性或可用的三维结构。然而，这些工具仅用于预测，其对致病后果的解读应谨慎使用。
人们已利用 menin 的结构来评估错义突变的影响。一项研究将 159 个独特的MEN1错义突变映射到 menin 的 3D 结构上，结果表明 66% 位于可能破坏蛋白质结构稳定的埋藏残基中。其余 34% 位于暴露于溶剂的位点，可能会损害蛋白质 - 蛋白质相互作用。这项研究并未比较致病性和良性错义突变之间的差异。另一项研究对 345 个MEN1错义突变进行了计算机热力学分析，分析了来自蛋白质数据库的各种结构的 menin 单独或与相互作用伙伴肽（MLL、JUND 或 MLL/LEDGF）或 menin-MLL 相互作用的小分子抑制剂形成的复合物。蛋白质结构的热力学不稳定度以 FoldX 程序计算的氨基酸取代引起的自由能变化 (ΔΔG) 来衡量。较高的 ΔΔG 值（> 4 kcal/mol）与强烈的不稳定效应相关，从而提供计算机模拟阳性预测值来区分致病性和良性错义变异。
2015 年，美国医学遗传学和基因组学学会 (ACMG) 和分子病理学协会 (AMP) 在其标准和指南中推荐了一种变异分类框架。该框架提出了一个 5 级变异分类系统：致病、可能致病、意义不明、可能良性和良性。该分类基于等位基因频率、分离、从头、蛋白质表达、功能研究和其他因素。对于MEN1错义变异的解释，TENGEN 网络 (法国神经内分泌肿瘤肿瘤遗传学网络) 提出了对 ACMG-AMP 框架的调整。这些建议可用于MEN1错义变异的分类和 MEN1 的基因诊断。
分子遗传学研究进展及其在MEN1基因诊断中的应用MEN1基因检测的优势之一是能够确诊临床MEN1。然而，对于临床MEN1患者，如果其疾病表现不完整，仅表现为表型拟态，或MEN1样病变，且其特征为在3个主要MEN1相关内分泌组织中仅有1个出现肿瘤，则MEN1基因检测结果为阴性。识别出至少有一个与MEN1重叠特征的内分泌肿瘤综合征的易感基因，有助于扩展MEN1突变阴性病例的基因诊断范围，使其能够将这些额外的基因纳入基因检测方法中（图5）。在有或无临床 MEN1 家族史的10% 至 30% 的MEN1种系突变阴性病例中，少数病例可能罕见地检测出 MEN1 样疾病基因的种系突变阳性（ CDKN1B或其他 CDKI 基因、CDC73、CASR、GNA11、AP2S1、GCM2和AIP）。因此，应通过基因组学方法进一步评估临床 MEN1 样病例的遗传易感性，以确定致病突变和基因。
图 5.MEN1 及 MEN1 样疾病种系基因筛查建议方法示意图。MEN1：指患者患有 2 种或以上 MEN1 相关内分泌肿瘤。MEN1 样：指患者仅患有 3 种主要 MEN1 相关内分泌肿瘤中的一种。临床 MEN1：指患者具有 MEN1 或 MEN1 样疾病的特征。遗传性 MEN1：指种系MEN1突变阳性。WES（全外显子组测序）；WGS（全基因组测序）；+ve：基因检测阳性；-ve：基因检测阴性；+ve*：根据美国医学遗传学与基因组学学会 (ACS) 和分子病理学协会 (AMO) 的指南，基因检测阳性。
在临床MEN1病例中发现潜在缺失的MEN1突变的一种方法是筛查MEN1的非编码区（启动子、内含子和非翻译区），这些区域不属于当前基因检测方法。一项研究对MEN1的整个7.2千碱基基因组区域进行了靶向二代测序，在76例患者中，有16例未检测到突变。此外，76例病例中均未在MEN1的非编码区中出现点突变或短插入/缺失突变，这表明此类突变可能非常罕见。
仅有一项研究对既往MEN1基因检测呈突变阴性的患者的体质和肿瘤 DNA 样本进行了 WGS 。在分析的 6 名患者中，令人惊讶的是，在 3 名患者中发现了致病性MEN1种系杂合突变（2 个剪接位点变异 c.1186-2A > G 和 p.Arg223Arg (CGG > CGC)，以及一个错义变异 p.Pro12Leu），而之前的常规基因检测却遗漏了这些变异。一名患者在CASR (p.Ile555Val) 中出现致病性种系杂合错义突变，一名患者在 1q 染色体上出现种系杂合缺失，包括CDC73。在同一研究中，对另外 6 名突变阴性患者的肿瘤 DNA 样本进行的 WGS 未检测到任何可能作为肿瘤抑制因子的复发基因体细胞变异。因此，本次全基因组测序（WGS）分析的结果提示，先前常规基因检测可能遗漏种系突变，这可能是由于测序或变异分类方法较旧所致。因此，对于出现临床MEN1症状且MEN1突变可能性较高的个体（甲状旁腺、垂体和内分泌性胰腺肿瘤；或甲状旁腺和内分泌性胰腺肿瘤），重复进行MEN1基因检测可能有所帮助。
可以考虑通过合作和其他新方法来识别10% 至 30% 临床 MEN1 突变阴性病例中的MEN1或其他基因的突变。血液转录组测序已被用于识别罕见疾病基因，即对从全血样本中分离的 RNA 进行 RNA 测序分析，以检测由于 DNA 变异导致的转录改变的任何证据。如果转录本在血细胞中表达（例如MEN1），则可以检测到编码外显子内的错义、同义和功能丧失突变对剪接和表达水平的影响。功能丧失突变可通过无义介导的衰变导致转录水平降低。此外，血液转录组分析可以识别由于调控区变异导致的一个等位基因表达降低。当与 WGS 结合时，可以识别出目标基因中导致转录改变的相应 DNA 变异。这种方法的局限性之一是，由于致病基因在血细胞中缺乏表达，因此无法识别致病基因。此外，如果致病变异不影响基因的剪接或表达，这种方法可能无法成功识别疾病易感基因。
瘤，并可实现安全的组织消融。2015 年，Armellini 等人证明了 EUS-RFA 对拒绝手术的 pNET 患者进行治疗的安全性和可行性。消融后，患者无症状，1 个月后的 CT 显示放射学消融完全，这表明 RFA 在某些病例中可作为手术的潜在替代方案。 Lakhtakia 和 Seo 以及 Waung 等报道，对 4 例胰岛素瘤患者进行了 EUS-RFA 治疗，经过 12 个月和 10 个月的随访，所有患者均获得临床完全缓解（2 例患者获得形态学完全缓解）。也有研究探讨了胰腺病变射频消融 (RFA) 对全身免疫调节反应的影响。初步评估 RFA 全身反应的结果已证明，对于局部晚期胰腺肿瘤（并非特指 pNET），增加免疫调节作用的证据是可行的。一个研究小组观察到，免疫抑制的适应性反应普遍激活。这种情况是否也适用于 pNET 尚需进一步研究。