编者按
代谢相关脂肪性肝病（MASLD）及其更严重的炎症形式——代谢相关脂肪性肝炎（MASH），已成为全球性的重大健康挑战。然而，针对此病的有效药物治疗手段仍然有限。G蛋白偶联受体75（GPR75）是GPCR家族中的一个孤儿受体。此前的人类遗传学研究表明，GPR75的功能缺失变异与较低的体脂率和身体质量指数（BMI）相关。在动物模型中，全身性敲除Gpr75的小鼠能够抵抗高脂饮食诱导的肥胖，并改善胰岛素敏感性。然而，这些研究多集中于GPR75通过调控食物摄入来影响全身代谢，其在肝脏中是否直接调控脂质积累和MASH进展的机制尚不明确。发表在Hepatology的一项研究首次深入揭示了肝细胞特异性GPR75在MASH发生发展中的关键作用及其分子机制，并提出了以GPR75为靶点的治疗新策略。
文章图形摘要
MASH是代谢综合征在肝脏的表现，其特征是肝细胞脂肪变性、炎症、气球样变和纤维化。肝脏脂质代谢的失调是核心致病环节。GPR75在健康个体的肝脏中表达量并不高，但全外显子组测序数据显示，其基因变异与较低的肝脂肪变性风险相关。有趣的是，促进瘦身的基因变异有时会矛盾地增加脂肪肝风险，这提示我们需要更精细地理解特定基因在特定组织（如肝脏）中的功能。此外，尽管已有研究发现趋化因子CCL5和二十羟二十碳四烯酸（20-HETE）可能是GPR75的内源性配体，但GPR75在MASH中的直接作用机制仍为明晰。
基于此，该研究旨在明确GPR75在肝脏MASLD/MASH进展中的具体功能，并阐明其下游信号通路，以评估其作为治疗靶点的潜力。
核心发现01
GPR75蛋白在MASH肝脏中特异性上调
研究人员首先在人类和小鼠样本中验证了GPR75的表达情况。通过对公共基因表达数据库（GEO）的分析以及定量PCR检测，他们发现无论是在MASH患者还是饮食诱导的MASH小鼠肝脏中，GPR75的mRNA水平与正常对照相比均无显著差异。然而，蛋白质水平的检测却呈现出截然不同的结果：免疫组化染色显示，在MASH及肝纤维化患者的肝组织中，GPR75蛋白水平显著增加；蛋白质印迹和免疫荧光实验进一步证实，在高脂饮食（HFD）或胆碱缺乏高脂饮食（CDAHFD）诱导的MASH小鼠肝脏中，GPR75蛋白同样被显著上调。这一发现揭示了GPR75在MASH状态下存在转录后水平的调控，其蛋白稳定性或运输过程可能发生了改变。
02
肝细胞GPR75缺失缓解MASH，而过表达则加重MASH
为了探究GPR75上调的功能意义，研究团队构建了肝细胞特异性敲低、敲除及过表达Gpr75的小鼠模型。
敲低/敲除实验：通过腺相关病毒（AAV8）介导的肝细胞特异性敲低Gpr75，或利用Cre-loxP系统构建肝细胞特异性敲除（Gpr75hko）小鼠，并用CDAHFD或HFD喂养。结果表明，降低肝细胞GPR75表达能够显著减轻小鼠的肝脏重量/体重比、肝脂肪变性（HE和油红O染色显示脂滴减少）、肝脏甘油三酯（TG）和游离脂肪酸（NEFA）含量。同时，肝损伤标志物（血清ALT/AST）、炎症因子（如TNF-α, IL-1β, IL-6）和纤维化标志物（如α-SMA, COL1A1）的表达也明显下降。重要的是，肝细胞特异性敲除Gpr75还能改善HFD小鼠的全身糖代谢和胰岛素敏感性。
过表达实验：相反，通过AAV8介导的肝细胞特异性过表达Gpr75，则加重了饮食诱导的MASH表型。过表达小鼠表现出更严重的肝脂肪变性、炎症细胞浸润、胶原沉积（纤维化）、肝损伤以及脂质合成相关基因的上调。
这些功能获得和功能缺失实验强有力地证明了肝细胞GPR75是驱动MASH进展的关键促进因子，其表达水平与疾病严重程度正相关。
03
GPR75通过偶联GNAI2抑制cAMP-PKA通路，促进脂质合成
作为GPCR，GPR75需要偶联G蛋白来传递信号。为了寻找其下游效应分子，研究者对对照和GPR75敲低小鼠的肝脏进行了蛋白质组学分析。基因富集分析提示GPR75与GTP结合等通路相关。进一步的火山图分析发现，抑制性G蛋白亚基Gαi2（由Gnai2编码）在GPR75敲低后显著减少。后续实验验证了GNAI2的mRNA和蛋白水平均受GPR75表达量的调控。
相互作用验证：免疫共沉淀（Co-IP）实验在棕榈酸处理的HepG2细胞中证实了GPR75与GNAI2之间存在直接的蛋白相互作用。免疫荧光染色也显示两者在MASH小鼠肝脏中存在共定位。
信号通路解析：G蛋白Gαi亚家族的主要功能是抑制腺苷酸环化酶（AC）的活性，从而降低细胞内第二信使环磷酸腺苷（cAMP）的水平，进而抑制蛋白激酶A（PKA）的活化。本研究提出并验证了以下通路：GPR75通过偶联并可能激活GNAI2，抑制了AC-cAMP-PKA信号通路。PKA活性的降低，导致其下游底物——固醇调节元件结合蛋白1c（SREBP-1c）的磷酸化受到抑制。
关键转录因子SREBP-1c的作用：SREBP-1c是调控肝脏脂肪从头合成（DNL）的关键核转录因子。PKA通常通过磷酸化SREBP-1c或其上游调控因子（如肝脏X受体α， LXRα）来抑制其活性和成熟，从而减少脂质合成。本研究发现，GPR75过表达抑制PKA磷酸化，增加了SREBP-1c（特别是其成熟的核形式）的蛋白水平，进而上调了Acc1, Fasn, Scd1等脂质合成基因的表达，最终导致肝细胞脂质积累。相反，敲低GPR75或敲低GNAI2都能激活PKA，降低SREBP-1c水平，缓解脂质堆积。体内实验也证明，在GPR75过表达的小鼠中，同时敲低Gnai2可以逆转其加重的肝脂肪变性、炎症和纤维化表型。
04
上游调控：VPS35通过循环运输维持GPR75的膜蛋白稳定性
一个关键问题是：为何MASH时GPR75蛋白水平升高而mRNA不变？研究者从蛋白降解和运输角度进行了探索。他们发现，在MASH状态下，GPR75的降解速度减慢。通过免疫沉淀联合质谱（IP-MS）分析寻找与GPR75相互作用的蛋白，并将目标锁定在逆运复合体的核心组分VPS35上。VPS35已知负责将膜蛋白从内体循环运输至细胞膜，而非运往溶酶体降解。
实验证据：Co-IP和免疫荧光证实VPS35与GPR75在肝细胞内相互作用并共定位。机制上，VPS35通过将GPR75回收到肝细胞膜上，减少了其被溶酶体降解的机会，从而在转录后水平稳定并上调了GPR75的蛋白表达。沉默VPS35会加速GPR75的降解，减弱棕榈酸诱导的肝细胞脂质积累。
体内功能：在CDAHFD喂养的小鼠中，敲低肝脏Vps35能够改善MASH表型，包括减轻脂肪变性、炎症和纤维化。重要的是，Vps35敲低导致了GPR75蛋白水平的下降，并激活了PKA磷酸化，其效果与直接敲低Gpr75类似。临床数据分析也显示，MASH患者肝脏中VPS35的表达上调。
因此，VPS35-GPR75轴构成了一个在MASH中放大致病信号的正反馈环路：疾病状态上调VPS35，VPS35稳定并增加膜上的GPR75，GPR75再通过GNAI2-cAMP-PKA-SREBP-1c通路促进脂质合成与炎症，加剧MASH。
05
治疗转化：靶向GPR75的化合物筛选
基于上述机制，研究团队以GPR75为靶点，利用计算机辅助分子对接技术筛选具有高亲和力的化合物。其中，化合物X201415（CAS 477252-30-5）在细胞热转移实验（CETSA）中显示能与GPR75结合并提高其热稳定性。在HepG2细胞中，X201415能以剂量依赖的方式抑制棕榈酸诱导的脂滴积累，且该保护作用在GPR75被敲除后消失，证明其特异性作用于GPR75。
在CDAHFD诱导的MASH小鼠模型中，口服给予X201415（20 mg/kg/天）进行治疗。结果显示，治疗显著降低了小鼠的肝脏重量、减轻了肝脂肪变性和纤维化程度，降低了肝脏TG含量，并下调了炎症和纤维化相关基因的表达。在机制上，X201415处理激活了肝脏中的cAMP-PKA通路，并降低了SREBP-1c蛋白水平。
小 结该研究将GPR75确立为肝脏脂质代谢和MASH进展的一个新型关键调节因子，完整描绘了从VPS35介导的膜蛋白稳定，到GPR75-GNAI2偶联，最终通过经典cAMP-PKA-SREBP-1c轴调控脂质合成的完整信号链条。它为解决当前MASLD/MASH领域药物治疗匮乏的困境提供了新的思路和实验基础。未来的研究可进一步探索GPR75特异性拮抗剂的优化、其在不同细胞类型中的作用，以及该通路在人类MASH患者中的临床相关性，从而加速相关疗法向临床应用的转化。
参考文献：Yang X, Yang N, Cheng Z, et al. Hepatic GPR75 exacerbates MASH through GNAI2-Dependent signaling. Hepatology. Published online February 3, 2026. doi:10.1097/HEP.0000000000001706